Спектр Аміно кислот

Нещодавно інженери США Avantes відтворили низку експериментів, проведених із зразками триптофану, тирозину та альбуміну сироватки великої рогатої худоби, щоб продемонструвати наші можливості виявлення білка. Команда використовувала звичайне збудження з безперервним широкосмуговим оптичним джерелом світла вольфраму / галогену (AvaLight-DHc). Реєстрували абсорбційні вимірювання, що співвідносили зміни концентрації зі змінами поглинання. Під час цього експерименту флуоресценція не вимірювалася.

 

Хоча триптофан і тирозин можуть збуджуватися при однаковій довжині хвилі, вони мають різні квантові виходи, що дають чітко різні сигнали флуоресценції в чистому вигляді, але триптофан і тирозин присутні в альбуміні сировини великої рогатої худоби (BSA), завдяки чому сигнал флуоресценції тирозину є гасить триптофан через процес резонансної передачі енергії.

Команда, яка проводила цей експеримент, підготувала три різні концентрації для кожного з трьох аналізованих зразків: 1 мг / мл, 0,5 мг / мл та 0,25 мг / мл та взяла профілі спектрів широкосмугового поглинання для кожного.

Усі зразки з різними концентраціями

AvaSpec Mini AvaSpec Mini AvaSpec-NIR
ALL SAMPLES
AT 0.25 MG/ML
ALL SAMPLES
AT 0.50 MG/ML
 
ALL SAMPLES
AT 1.00 MG/ML


 За зразком у кожній концентрації
AvaSpec Mini AvaSpec Mini AvaSpec-NIR
TRYPTOPHAN TYROSINE BSA ALBUMIN

Система вимірювання

  • AvaSpec-ULS3648-UA-25
  • AvaLight DHc
  • Inline Cuvette holder with hood (CUV-UV/VIS)
  • Fiber Optic Cables
  • Short path-length (1mm) cuvette

 

Довжина хвиль поглинання та флуоресценції для звичайних амінокислот

(reference data from original experiment)

 

Absorption

Fluorescence

Amino Acids

Concentrations

Wavelength

Absorptivity

Wavelength

Quantum Yield

Tryptophan

1.0 mg/ml

0.5 mg/ml

0.25mg/ml

280 nm

5,600

348 nm

0.20

Tyrosine

1.0 mg/ml

0.5 mg/ml

0.25mg/ml

274 nm

1,400

303 nm

0.14

Phenylalanine

(BSA)

1.0 mg/ml

0.5 mg/ml

0.25mg/ml

257 nm

200

282 nm

0.04

 


 

Посилання

https://www.avantes.com/applications/application/item/1254-amino-acid-spectra

Held, P. "Quantitation of peptides and amino acids with a Synergy™ HT using UV fluorescence." B.-T. Instruments, Winooski, VT (2003).